FITC&AMC等熒光標(biao)記技術(shu)
熒(ying)光(guang)(guang)(guang)標(biao)(biao)記(ji)(ji)所(suo)依賴(lai)的(de)(de)(de)化合(he)物(wu)(wu)(wu)稱為熒(ying)光(guang)(guang)(guang)物(wu)(wu)(wu)質(zhi)。熒(ying)光(guang)(guang)(guang)物(wu)(wu)(wu)質(zhi)是指具(ju)有共軛雙鍵體系化學結構的(de)(de)(de)化合(he)物(wu)(wu)(wu)，受到紫外光(guang)(guang)(guang)或藍紫光(guang)(guang)(guang)照射時，可激發(fa)成(cheng)為激發(fa)態(tai)，當從激發(fa)態(tai)恢復基態(tai)時，發(fa)出熒(ying)光(guang)(guang)(guang)。熒(ying)光(guang)(guang)(guang)標(biao)(biao)記(ji)(ji)技術指利用熒(ying)光(guang)(guang)(guang)物(wu)(wu)(wu)質(zhi)共價結合(he)或物(wu)(wu)(wu)理吸附(fu)在(zai)所(suo)要研(yan)(yan)究(jiu)分(fen)子的(de)(de)(de)某個基團(tuan)上(shang)，利用它的(de)(de)(de)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)特性(xing)來(lai)提供被研(yan)(yan)究(jiu)對象的(de)(de)(de)信息。熒(ying)光(guang)(guang)(guang)標(biao)(biao)記(ji)(ji)的(de)(de)(de)無放(fang)射物(wu)(wu)(wu)污染(ran)，操作簡(jian)便等優點，使得熒(ying)光(guang)(guang)(guang)標(biao)(biao)記(ji)(ji)物(wu)(wu)(wu)在(zai)許多研(yan)(yan)究(jiu)領域(yu)的(de)(de)(de)應用日(ri)趨(qu)廣泛。人們利用利用熒(ying)光(guang)(guang)(guang)標(biao)(biao)記(ji)(ji)的(de)(de)(de)多肽(tai)來(lai)檢測目標(biao)(biao)蛋白的(de)(de)(de)活(huo)性(xing)，并將其發(fa)展的(de)(de)(de)高通量活(huo)性(xing)篩選方(fang)法應用于(yu)疾病治療靶點蛋白的(de)(de)(de)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)篩選和藥(yao)物(wu)(wu)(wu)開發(fa)（例如，各種激酶、磷酸酶、肽(tai)酶等）。肽(tai)谷生物(wu)(wu)(wu)經過(guo)長期(qi)開發(fa)，能(neng)夠(gou)提供技術成(cheng)熟(shu)的(de)(de)(de)各種熒(ying)光(guang)(guang)(guang)標(biao)(biao)記(ji)(ji)多肽(tai)。
除了FRET熒光淬滅組合，肽谷生物還可以提供包括FITC, FAM, TAMRA, Biotin等種類齊全的多肽熒光標記服務。
下面是一些常(chang)見的多肽(tai)修飾熒光物質結構：
; 下表是(shi)一(yi)些(xie)熒光物質的激(ji)發(fa)光波長(chang)Ex(nm)和發(fa)射光波長(chang)Em(nm):
羥基香豆素
325
386
R-phycoerythrin
(PE) (489)
565
578
丹磺酰氯
340
578
Rhodamine Red-X
560
580
AMC
345
445
Tamara
565
578
甲氧基香豆素
360
410
Alexa fluor 555
556
573
Alexa fluor 系(xi)列(lie)
345
442
Alexa fluor 546
556
573
氨基香豆素
350
445
Rox
575
602
Dabcyl
453
-
Alexa fluor 568
578
603
Cy2
490
510
Texas Red
589
615
FAM
495
517
Alexa fluor 594
590
617
Alexa fluor 488
494
517
Alexa fluor
621
639
FITC
495
519
Alexa fluor 633
650
668
Alexa fluor 430
430
545
Cy5 (625)
650
670
5-FAM
492
518
Alexa fluor 660
663
690
Alexa fluor 532
530
555
Cy5.5
675
694
HEX
535
556
TruRed 490
675
695
5-TAMRA
542
568
Alexa fluor 680
679
702
Cy3
550
570
Cy7
743
767
TRITC
547
572
Cy3.5
581
596
FITC(異硫氰酸熒光素)具有比較高的活性，我們公司可以通過兩種方式將FITC標記于多肽上：(1) 將FITC標記于賴氨酸（Lys）或被選擇性地脫保護的鳥氨酸（ornithine）側鏈氨基上；(2) 將FITC標記于多肽N端氨基。
當在N端標記時，建議在最后一個氨基和由異硫氰酸酯與氨基反應產生的硫脲鍵之間引入烷基間隔器（alkyl spacer）如氨基己酸（Ahx）。鏈接切割需要酸性環境，在N端標記FITC的多肽需經歷環化作用來形成熒光素，通常會伴有最后一個氨基酸的去除，但當有一個間隔器如氨基己酸，或者是通過非酸性環境將目的肽從樹脂上切下來時，這種情況可避免。空間位阻被認為是在熒光染料前使用Ahx的主要原因，而不是為什么FITC不能直接偶聯在多肽上的原因。
Ahx或(huo)b-Ala均(jun)可(ke)作為間隔器用于(yu)FITC標記的(de)多肽上(shang)。
AMC(7-氨基-4-甲基香豆素)是一種應用廣泛的熒光標記試劑， 與其他熒光染料不同的是，AMC修飾多肽分子是從C端進行：
（1）AMC與肽鏈C端第一個氨基酸反應;
（2）固相合成整條肽鏈（從第二個氨基酸開始），并且保留整條肽鏈的側鏈保護基和最后一個氨基保護基；
（3）液相縮合AA-AMC與全保護的肽鏈；
（4）切除保護基，完成肽鏈的修飾。
通常，生物素、FITC等染料可任意標記在多肽N端或C端。但我們推薦N端標記，其成功率更高、所需時間更短、更易操作。由于多肽都是從C端往N端合成，所以N端修飾將是固相合成的最后一步，不再需要額外的偶聯步驟。相反，如果是C端標記，則需要附加步驟，而過程會更復雜。
大多(duo)數染料都(dou)是大型的(de)(de)(de)芳香分(fen)(fen)子，如此龐大分(fen)(fen)子的(de)(de)(de)介(jie)入(ru)(ru)有(you)助(zhu)于避免(mian)標簽(qian)和(he)多(duo)肽(tai)之間的(de)(de)(de)相互作用。這將有(you)助(zhu)于保持多(duo)肽(tai)的(de)(de)(de)構象和(he)生(sheng)物(wu)學活性。一(yi)般來說，推(tui)薦引入(ru)(ru)一(yi)個柔性間隔如Ahx(一(yi)個6碳化合物(wu))會使熒光標記更加穩定。否則(ze)FITC將很容易與其他任何位置(zhi)的(de)(de)(de)半胱氨酸(suan)的(de)(de)(de)巰基或賴氨酸(suan)的(de)(de)(de)氨基發生(sheng)連接。
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