常見問題與解答
一般來說，相同序列和修飾、相同數量的(de)(de)多(duo)(duo)肽(tai)會(hui)因為其純(chun)(chun)度(du)的(de)(de)不同而(er)價(jia)格各(ge)異，純(chun)(chun)度(du)越(yue)高，單(dan)位質量的(de)(de)多(duo)(duo)肽(tai)價(jia)格也(ye)越(yue)高。肽(tai)谷生(sheng)物可以提供粗品、脫鹽，70%到99%不同純(chun)(chun)度(du)級別的(de)(de)多(duo)(duo)肽(tai)供客戶按需選擇使用。 各(ge)種多(duo)(duo)肽(tai)純(chun)(chun)度(du)及(ji)應用范圍如(ru)下：
大規模功能性篩選
粗品多肽
肽微陣列
作為制備抗體的抗原
層析法
酶聯免疫吸附試驗檢測抗血清滴度
>70%和>75%的多肽
免疫印跡法（非定量）
酶底物肽（非定量）
封閉肽（非定量
親和純化
磷酸化檢測
蛋白電泳的應用和免疫細胞化學
>80%，>85%和(he)>90%的(de)多肽
標準酶聯免疫吸附試驗和RIA（定量）
受體配體相互作用（定量）
體內、體外 生物學測定
酶的研究和阻斷實驗（定量）
NMR研究
質譜分析
其他定量檢測
>95%的多肽(tai)
SAR研究
臨床試驗
APIs(藥物活性成分)
工業品
X-ray晶體研究
其他敏感的實驗：酶與底物、受體與配體相互作
用、阻斷和競爭實驗
>98%的多肽
所有(you)(you)的(de)(de)凍干多(duo)肽(tai)產品可以(yi)在(zai)常溫(wen)下避光運輸，并可以(yi)在(zai)室溫(wen)條(tiao)件(jian)下保存(cun)幾天或者少于一個星(xing)期，多(duo)肽(tai)性狀是穩(wen)定的(de)(de)。所有(you)(you)的(de)(de)凍干多(duo)肽(tai)產品，都必(bi)須(xu)保存(cun)在(zai)干燥(zao)低(di)溫(wen)的(de)(de)條(tiao)件(jian)下，以(yi)-20℃的(de)(de)低(di)溫(wen)為佳，若(ruo)有(you)(you)條(tiao)件(jian)最好保存(cun)在(zai)-80℃以(yi)下，在(zai)這(zhe)樣的(de)(de)條(tiao)件(jian)下大多(duo)數多(duo)肽(tai)可存(cun)放1-2年。
當需要(yao)使用多肽(tai)產(chan)品時(shi)，應在開(kai)蓋之前將多肽(tai)產(chan)品升至室溫；對保存于-20℃的產(chan)品，該過程需要(yao)1h或(huo)更長，因包裝大小(xiao)而異。否(fou)則(ze)，當打開(kai)瓶蓋時(shi)，水氣進入會導(dao)致多肽(tai)凝(ning)縮而降低其(qi)穩定(ding)性。一旦打開(kai)，應迅速稱(cheng)量完畢，并立(li)即密閉以免潮解，親水肽(tai)尤其(qi)應注意。
對序列中(zhong)含有(you)Cys、Met、Try的(de)易(yi)氧化多肽和含有(you)Gln、Asn、Asp的(de)易(yi)降解多肽，應避(bi)免反復融(rong)凍(dong)(dong)，以免多肽被氧化和降解，因(yin)此建議分(fen)裝成小包裝保(bao)存(cun)。需要多少解凍(dong)(dong)多少，用后棄(qi)去(qu)，不要保(bao)存(cun)。
對(dui)于(yu)暫時(shi)不用的多(duo)肽，不要(yao)以溶液的形式保存（即使在-80°C的條件(jian)下）。
多(duo)肽的(de)溶(rong)(rong)(rong)(rong)解性(xing)(xing)(xing)(xing)很大程度上取決(jue)于(yu)多(duo)肽的(de)極性(xing)(xing)(xing)(xing)。酸(suan)(suan)(suan)(suan)性(xing)(xing)(xing)(xing)的(de)蛋(dan)白溶(rong)(rong)(rong)(rong)解于(yu)堿(jian)性(xing)(xing)(xing)(xing)溶(rong)(rong)(rong)(rong)液， 而(er)堿(jian)性(xing)(xing)(xing)(xing)蛋(dan)白可(ke)溶(rong)(rong)(rong)(rong)解于(yu)酸(suan)(suan)(suan)(suan)性(xing)(xing)(xing)(xing)溶(rong)(rong)(rong)(rong)液，含(han)有大量(liang)(liang)不帶電(dian)荷的(de)極性(xing)(xing)(xing)(xing)氨基(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)殘基(ji)或(huo)疏(shu)水(shui)性(xing)(xing)(xing)(xing)氨基(ji)酸(suan)(suan)(suan)(suan)的(de)疏(shu)水(shui)性(xing)(xing)(xing)(xing)多(duo)肽和中性(xing)(xing)(xing)(xing)多(duo)肽可(ke)先溶(rong)(rong)(rong)(rong)解于(yu)少量(liang)(liang)有機溶(rong)(rong)(rong)(rong)劑中，如DMSO、DMF、醋酸(suan)(suan)(suan)(suan)、乙腈(jing)、甲醇、丙(bing)醇或(huo)異(yi)丙(bing)醇，然后加(jia)蒸餾水(shui)稀釋。含(han)有甲硫氨酸(suan)(suan)(suan)(suan)或(huo)半胱氨酸(suan)(suan)(suan)(suan)的(de)多(duo)肽不能(neng)用(yong)DMSO溶(rong)(rong)(rong)(rong)解，因(yin)為(wei)DMSO可(ke)能(neng)造(zao)成側鏈氧化。
多肽(tai)溶(rong)解測(ce)試(shi)(shi)： 在(zai)多肽(tai)溶(rong)解之前先取小部(bu)分進行多肽(tai)溶(rong)解測(ce)試(shi)(shi)，您(nin)需要測(ce)試(shi)(shi)幾種不同的溶(rong)劑，直到找到最適當的一種。超(chao)(chao)聲處(chu)理(li)有助于打碎顆粒并(bing)增加溶(rong)解度。（注意: 超(chao)(chao)聲處(chu)理(li)會引起溶(rong)液發(fa)熱和多肽(tai)降解。）
1，
將每個酸性氨基酸賦值為-1，包括天冬氨酸（D）、谷氨酸（E）、以及羧基末端-COOH。 每個堿性氨基酸賦值為+1，包括精氨酸（R）、賴氨酸（K）、組氨酸（H）以及氨基末端-NH2。然后計算整個多肽的電荷數。2，
如果整段肽所帶電荷是陽性的，說明該肽是堿性的。可先嘗試用蒸餾水來溶解；如果不溶于水，接著嘗試用少量10%-25%醋酸溶解，如果仍然失敗的話，添加一些TFA（10-50微升）來增溶，然后用水稀釋至理想濃度。3，
如果整段肽所帶電荷是陰性的，說明該肽是酸性的。酸性的多肽可以嘗試用PBS（PH 7.4）來溶解， 如果不溶的話，添加少量的堿性溶劑，如0.1 M的碳酸氫銨，然后加水稀釋至理想濃度。含有游離半胱氨酸的多肽應溶于脫氣的酸性緩沖液中，因為當PH值大于7時，巰基會被迅速氧化成二硫化物。4，
如果整段肽電荷是零，說明肽是中性的。中性肽通常溶于有機溶劑。首先，嘗試添加少量乙腈、甲醇或異丙醇。對于高度疏水的多肽，可使用少量的二甲基亞砜溶解，然后用水稀釋至理想濃度。對于含有自由半胱氨酸的肽，需使用DMF而不是DMSO。對于有聚集傾向的肽，可添加6M鹽酸胍或8M尿素，然后進行必要的稀釋。為了(le)防止或盡量減(jian)少(shao)多肽(tai)(tai)降解，請將(jiang)多肽(tai)(tai)以(yi)(yi)凍(dong)干粉形式(shi)保(bao)存(cun)(cun)在-20°C，-80°C更佳。如果需要保(bao)存(cun)(cun)溶(rong)液(ye)肽(tai)(tai)，最好分(fen)成(cheng)小樣(yang)存(cun)(cun)放，以(yi)(yi)避免(mian)反復凍(dong)融。一份樣(yang)品融凍(dong)后未(wei)用(yong)完，應扔(reng)掉。細菌降解有時會成(cheng)為溶(rong)液(ye)肽(tai)(tai)的麻煩，所以(yi)(yi)請將(jiang)肽(tai)(tai)溶(rong)于(yu)無菌水或肽(tai)(tai)溶(rong)液(ye)過(guo)濾(lv)除菌。
如(ru)何選擇合適的(de)熒光標記基團(tuan)取決于您的(de)實(shi)驗(yan)需(xu)求。藥理(li)學實(shi)驗(yan)研究基本(ben)分為體內研究和體外研究兩大(da)類。
對于體內(nei)研(yan)究，一(yi)般選(xuan)擇發射(she)波長在650-900nm的(de)熒光(guang)基團，例(li)如：ICG、Cy5.5和 Nile Blue。這是因為這類(lei)基團所發出的(de)熒光(guang)具有較好(hao)的(de)組織穿透能力，受(shou)背(bei)景干擾(rao)較小(水、血紅蛋白和脫氧血紅蛋白一(yi)般都(dou)會(hui)產(chan)生背(bei)景干擾(rao)吸收，其(qi)區域在560nm左(zuo)右)。
對(dui)于體(ti)外研(yan)究，發射波長在400到(dao)600nm的熒光基團最為(wei)常(chang)用，例如：AMC、FITC和TAMRA。
熒光標(biao)記(ji)的多(duo)肽(tai)在現代(dai)醫學中的應(ying)用是很廣泛的。例(li)如：用Cy5.5標(biao)記(ji)的目標(biao)多(duo)肽(tai)研究對 c-Met受體的綁定作用。有人設計含有KSLSRHDHIHHH序列的cMBP，其(qi)C端為(wei)GGGSC， C端Cys用 Cy5.5-Maleimide標(biao)記(ji)其(qi)巰基(ji)側鏈。研究結果表(biao)明：上述Cy5.5-cMBP多(duo)肽(tai)與U87MG腫瘤細胞共(gong)孵24小(xiao)時后，具有較高的癌細胞攝取(qu)值，其(qi)響應(ying)濃度在納摩爾級別。
脫酰(xian)(xian)(xian)胺(an)反應(ying)(ying)：在脫酰(xian)(xian)(xian)反應(ying)(ying)中(zhong)，Asn/Gln 殘基水(shui)解形成Asp/Glu。非酶催化的(de)脫酰(xian)(xian)(xian)胺(an)反應(ying)(ying)的(de)進行(xing)。 在Asn-Gly-結構中(zhong)的(de)酰(xian)(xian)(xian)胺(an)基團更易(yi)水(shui)解，位于分子表面的(de)酰(xian)(xian)(xian)胺(an)基團也比分子內部的(de)酰(xian)(xian)(xian)胺(an)基團易(yi)水(shui)解。
氧(yang)(yang)(yang)化多(duo)肽溶液(ye)易氧(yang)(yang)(yang)化的主要原因(yin)有兩種，一是溶液(ye)中有過(guo)氧(yang)(yang)(yang)化物(wu)的污染，二是多(duo)肽的自(zi)發氧(yang)(yang)(yang)化。在(zai)所有的氨基酸殘基中，Met、Cys和His、Trp、Tyr等(deng)最易氧(yang)(yang)(yang)化。氧(yang)(yang)(yang)分(fen)壓、溫度和緩(huan)沖溶液(ye)對氧(yang)(yang)(yang)化也都(dou)有影響。
水(shui)解(jie)：多肽(tai)中的(de)肽(tai)鍵(jian)(jian)(jian)易水(shui)解(jie)斷裂。由(you)Asp參與形成(cheng)的(de)肽(tai)鍵(jian)(jian)(jian)比其它肽(tai)鍵(jian)(jian)(jian)更(geng)易斷裂，尤其是Asp-Pro和Asp-Gly 肽(tai)鍵(jian)(jian)(jian)。
形(xing)(xing)成(cheng)錯(cuo)誤(wu)的(de)二(er)(er)硫(liu)(liu)鍵(jian)：二(er)(er)硫(liu)(liu)鍵(jian)之間或二(er)(er)硫(liu)(liu)鍵(jian)與巰(qiu)基之間發生交(jiao)換可形(xing)(xing)成(cheng)錯(cuo)誤(wu)的(de)二(er)(er)硫(liu)(liu)鍵(jian)，導致三(san)級(ji)結構改變和活(huo)性(xing)喪(sang)失。
消旋(xuan)：除Gly外(wai)，所(suo)有氨基(ji)(ji)酸殘(can)基(ji)(ji)的α碳原子都(dou)是手性的，易(yi)在(zai)堿催化下發生消旋(xuan)反應(ying)(ying)。其中Asp殘(can)基(ji)(ji)最易(yi)發生消旋(xuan)反應(ying)(ying)。
β-消(xiao)除：β-消(xiao)除是(shi)指氨基酸(suan)殘基中(zhong)β碳原(yuan)子上基團的消(xiao)除。Cys、Ser、Thr、Phe、Tyr等殘基都可通過β-消(xiao)除降解。在堿性(xing)PH下易發生β-消(xiao)除，溫(wen)度和金(jin)屬離子對其也有影響。
變(bian)性(xing)、吸附(fu)、聚(ju)集(ji)或沉(chen)淀變(bian)性(xing)一般都與(yu)三級結構以及二級結構的破(po)壞有(you)關。在變(bian)性(xing)狀態，多(duo)肽往(wang)往(wang)更易(yi)(yi)發生化(hua)學反應，活性(xing)難以恢復。在多(duo)肽變(bian)性(xing)過程(cheng)中，首先形(xing)(xing)成中間體(ti)(ti)。通常(chang)中間體(ti)(ti)的溶解度低，易(yi)(yi)于聚(ju)集(ji)，形(xing)(xing)成聚(ju)集(ji)體(ti)(ti)，進而(er)形(xing)(xing)成肉眼(yan)可見(jian)的沉(chen)淀。
定點(dian)突(tu)變: 通(tong)過(guo)基(ji)因工程手段替(ti)換引(yin)起多(duo)肽(tai)不穩定的(de)殘(can)基(ji)或引(yin)入(ru)能增加多(duo)肽(tai)穩定性的(de)殘(can)基(ji)， 可提高多(duo)肽(tai)的(de)穩定性。
化(hua)學(xue)修飾: 多(duo)肽的(de)化(hua)學(xue)修飾方法很(hen)多(duo)，研究最多(duo)的(de)是PEG修飾。PEG是一(yi)種水溶性(xing)高分子化(hua)合 物，在體(ti)內(nei)(nei)可(ke)降(jiang)解(jie)(jie)，無毒。PEG與(yu)多(duo)肽結合后能改善(shan)多(duo)肽的(de)溶解(jie)(jie)性(xing)，可(ke)以進行(xing)生(sheng)物相容性(xing)調(diao)節，提高熱穩定性(xing)，抵抗蛋白酶的(de)降(jiang)解(jie)(jie)，降(jiang)低抗原性(xing)，延(yan)長(chang)體(ti)內(nei)(nei)半衰期。 選擇(ze)合適的(de)修飾方法和控(kong)制修飾程度(du)可(ke)體(ti)質或提高原生(sheng)物活性(xing)。
添(tian)加(jia)劑(ji): 通過加(jia)入添(tian)加(jia)劑(ji)，如糖類、多(duo)元醇、明膠、氨基(ji)酸和(he)某些鹽類，可(ke)以提高(gao)多(duo)肽(tai)(tai)的穩(wen)定性。糖和(he)多(duo)元醇在低濃(nong)度下迫(po)使更多(duo)的水分子圍繞在蛋(dan)白質(zhi)周圍，因而提高(gao)了(le)多(duo)肽(tai)(tai)的穩(wen)定性。在凍干過程中，上述物(wu)質(zhi)還(huan)(huan)可(ke)以取代(dai)水而與多(duo)肽(tai)(tai)形成氫鍵來穩(wen)定多(duo)肽(tai)(tai)的天然構象 ，而且還(huan)(huan)可(ke)以提高(gao)凍干制品的玻(bo)璃化(hua)溫度。此外表面活(huo)性劑(ji)如SDS、Tween、Pluronic能防止(zhi)多(duo)肽(tai)(tai)表面吸附、聚集和(he)沉淀。
凍(dong)干: 多肽(tai)(tai)發(fa)生(sheng)的(de)一(yi)系列化(hua)學反(fan)(fan)應如(ru)脫酰胺、β-消(xiao)除、水解等都需要(yao)水參(can)與，水還可以作為其它(ta)反(fan)(fan)應劑的(de)流動(dong)相。另外，水含量降(jiang)低可使多肽(tai)(tai)的(de)變性溫度(du)升高。因此，凍(dong)干可提高多肽(tai)(tai)的(de)穩定性。
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