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原核表達系統

      原核(he)(he)表(biao)達(da)系(xi)統(tong)是(shi)通過原核(he)(he)生(sheng)物來獲得外源蛋(dan)(dan)白(bai)的(de)(de)(de)體系(xi),也是(shi)最常用(yong)的(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)表(biao)達(da)體系(xi)之一,相比哺(bu)乳(ru)動物蛋(dan)(dan)白(bai)表(biao)達(da)系(xi)統(tong),其成本更(geng)低,操作(zuo)也更(geng)簡單。肽谷生(sheng)物可(ke)(ke)以提供的(de)(de)(de)原核(he)(he)表(biao)達(da)系(xi)統(tong)服(fu)務包括:可(ke)(ke)溶性蛋(dan)(dan)白(bai)表(biao)達(da)服(fu)務、內毒素檢測服(fu)務等。

  • 可溶性蛋白表達服務

          肽谷生物(wu)可溶性蛋白表(biao)達(da)采用大腸(chang)桿菌(E.coli)表(biao)達(da)系統進(jin)(jin)行(xing)重組(zu)蛋白生產,您只需要提供(gong)目標蛋白序(xu)列或(huo)其對(dui)應(ying)的基因序(xu)列,肽谷生物(wu)會按(an)照合同(tong)約定的量及純度進(jin)(jin)行(xing)交付。

    服務流程與項目

    內容

    周期

    1.基因合成

    密碼子優化與基因合成

    1-2周

    2.載體構建

    克隆至表達載體(質粒)

    質粒測序

             

    大量質粒制備

    2-3周

    3.表達評估

    轉化適合菌株

    小量發酵培養

    SDS-PAGE檢測
    評估蛋白表達情況

    1-2周

    4.蛋白表達及純化

    根據表達評估進行發酵

    蛋白純化

    SDS-PAGE檢測,UV分析

    2-3周

    交付內容:

    基因構建測序報告;


    表達評估及可行性報告;


    純化蛋白;


    SDS-PAGE報告及實驗報告。


  • 內毒素檢測

          肽谷生(sheng)物提供內(nei)(nei)毒(du)素(su)(su)檢(jian)測服務。內(nei)(nei)毒(du)素(su)(su)(endoroxin)是革蘭氏(shi)陰性細(xi)菌(如大(da)腸(chang)桿菌E.coli)細(xi)胞壁中(zhong)的一種成分(fen),叫做脂多糖(LPS)。大(da)腸(chang)桿菌在重組(zu)蛋白表達過程(cheng)中(zhong),會產生(sheng)大(da)量(liang)內(nei)(nei)毒(du)素(su)(su)。內(nei)(nei)毒(du)素(su)(su)是一種熱(re)源,會導致生(sheng)物體炎癥發熱(re)反應,所以使用(yong)重組(zu)蛋白于動物實(shi)驗時,內(nei)(nei)毒(du)素(su)(su)的檢(jian)測就(jiu)很有必(bi)要。

    常用實驗對內毒素的要求如下表:

    重組蛋白應用實驗

    對內毒素的要求

    體外酶活實驗

    無影響

    蛋白抗原、制備抗原

    無影響

    體外細胞分化培養

    要求低內毒素<1EU/ug

    其他動物體內實驗

    要求低內毒素

    內毒素檢測方法:

      &nbsp; 內毒素(su)的檢測(ce)方(fang)法(fa)有半定(ding)量(liang)的凝(ning)膠(jiao)法(fa)檢測(ce)和絕對定(ding)量(liang)的顯(xian)色(se)(se)法(fa)。目(mu)前國際上(shang)最精確的是基(ji)于鱟(hou)試劑的顯(xian)色(se)(se)法(fa)和凝(ning)膠(jiao)法(fa)。

    內毒素的一般水平與藥用標準:

    應用領域

    內毒素一般水平與標準

    大腸桿菌

    100萬 EU/ml

    自來水

    10-100 EU/ml

    生物制藥

    <0.01 EU/ml

    髓鞘內注射藥

    0.2 EU/kg

    非髓鞘內注射藥

    <5 EU/kg

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